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  • [PCR室] 用有机溶剂沉淀法分离与纯化蛋白质

    有机溶剂能降低溶液的电解常数,从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力,导致溶解度的降低;另外,有机溶剂与水的作用,能破坏蛋白质的水化膜,故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法,称有机溶剂分段沉淀法,它常用于蛋白质或酶的提纯。使...[阅读全文]

  • [PCR室] 用盐析方法分离与纯化蛋白质

    ①原理:盐析法对于许多非电解质的分离纯化都是适合的,也是蛋白质和酶提纯工作应用最早,至今仍广泛使用的方法。其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着盐液浓度升高而增加(此时称为盐溶);当盐浓度不断上升时,蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降...[阅读全文]

  • [PCR室] PCR设置内参照的定量方法

    PCR可分析极微量的DNA,并可同时扩增多种序列,已应用于基因转录水平的研究。尽管PCR是一种较理想的核酸定量方法,但实验方案的选择对PCR定量的成功与否极为重要,因为PCR是一个指数过程,控制反应率的任一参数的微小变化都会显著影响产物的生成量,在这些...[阅读全文]

  • [PCR室] PCR检测常见问题汇总(精品)

    PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究...[阅读全文]

  • [PCR室] 基因调节元件的特点及用途

    基因调节元件的测绘和分析(gene regulatory elements mappmg and analysis,GREMA)技术是由加州大学圣地亚哥分校(UCSD)付向东博士领导的研究小组发明的,并已经独家授权给ASB做商业开发。这一技术通过以下方法克服了第一代ChIPChip分析的限制。首先它不用免...[阅读全文]

  • [PCR室] 限制性酶及PCR的技术

    限制性酶及PCR的方法 此法将MSRE和PCR技术的结合,大大提高了检测DNA甲基化的灵敏度。该法基于DNA经MSRE切割后,位于限制性位点侧翼的特异性引物仅能有效扩增那些甲基化而免于切割的DNA片段,但不能扩增未甲基化且遭受切割的DNA片段。本法定性只需0.6ngDNA...[阅读全文]

  • [PCR室] 基因芯片实验操作流程

    1.样本DNA或RNA制备 芯片实验中核酸的抽提没有特殊之处,参照常规的分子生物学实验手册就可以。但对于RNA样本,由于RNA的稳定性很差,在活体内的半衰期也很短,因此取材一定要新鲜,取材后迅速保存在液氮中,在整个处理过程中要非常小心,以免降解,影响实...[阅读全文]

  • [PCR室] PCR检验标本接收程序SOP文件

    一、 目的 保证实验室工作的正常运行,以及时准确的获得实验结果。 二、 适用范围 从事分子生物实验室工作的检验专业人员。 三、 职责 分子生物检验室派出专门人员负责标本的接收。 四、 工作程序 1. 分子生物检验人员接收标本是首先应注意核对检验单:科别...[阅读全文]

  • [PCR室] 大肠杆菌的DNA基因探针技术基因芯片检测技术

    主要有EHEC毒性质粒、VTl、VT2、EAE基因探针。Hudk等使用EHEC 0157:H7质粒的限制性片段VPMl探针进行研究,发现所有的产毒性大肠杆菌和非大肠杆菌均为阴性,50株产Vero毒素的非0157仅5株出现阳性反应,而提高反应温度至45℃,5例假阳性可转变为2例阳性、3例...[阅读全文]

  • [PCR室] 原位免疫PCR的IHC增敏技术方法

    (一)基本原理 Sano等(1992)率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功,建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统,利用细胞工程和基因工程技术,巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合,通过构建单克隆抗体与重组...[阅读全文]

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