(一)石蜡切片IGSS
(1)切片脱蜡至水。
(2)0．1％胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修复20min(98℃)，自然冷却至室温。
(3)0．05mol/L(pH7．4)TBS洗3×3min。
(4)l％EA(卵蛋白)15min，不洗。
(5)适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h，或37℃孵育1h。
(6)0．05m01/L(pH7．4)TBS洗3×5min。
(7)0．02m01/L(pH7．4)TBS(内含0．1％BSA)洗10min。
(8)1％EA 15min，不洗，1：10～1：20稀释的PAGlonm室温孵育1h，或37℃孵育30min。
(9)0．05mol/L(pH7．4)TBS洗10min。
(10)1％戊二醛洗10min。
(11)双蒸水洗5min。
(12)1％明胶洗5min。
(13)银避光显影8～15min。
(14)双蒸水洗15min。
(15)固定：用显影定影液(1：4或1：10)固定5min，也可以用15％硫酸钠-20％硫代硫酸钠混合液固定1～3min，或用1％戊二醛固定5min，50℃温水洗3～6min。
(16)衬染，核固红衬染3min或甲基绿衬染3min。
(17)常规脱水，二甲苯透明，常规树胶封片。
(18)镜检：阳性物质呈黑色或黑褐色，颗粒分布于抗原—抗体反应部位；背景较干净，呈红色。
胃未分化癌IGSS-P53 HCC IGSS-HBsAg
核内内呈黑色阳性表达，背景为红色，×400 细胞浆内呈黑色阳性，×200
(二)冰冻切片IGSS
做冰冻切片的组织可先经过固定再作切片，也可先制作冰冻切片，然后再固定。这要根据保存抗原的需要而定，固定过的组织可用含20％蔗糖的PBS(0．1mol/L，pH7．4)浸泡过夜，使切片减少冰结晶，保持组织细胞良好的形态结构。切片人0．05mol/L(pH7．4)TBS洗3×3min，染色步骤同石蜡切片。
