微波炉法的原理是通过持续加热以破坏某些阻碍抗体进入的亚细胞结构。
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1.所需试剂,特殊设备
1.0mmol/LEDTA(pH 8.0);PBS。
微波炉。
2.操作步骤
(1)将标本片或样品放入支架或其他适宜的容器中。石蜡包埋样品的切片应脱蜡和再水化(见石蜡组织切片步骤7和8)。
(2)悬于1.0mmo[/LEDTA(用氢氧化钠调节pH值至8.0)中,于室温下孵育样品10min,其间摇动数次。
加热修复抗原传统的使用缓冲液是10mmol几柠檬酸钠(pH6.0) 新近有报道EDTA缓冲液的效果更好。
(3)将容器放进微波炉中,并标记加入缓冲液的高度。
(4)用750W微波处理样品,每次5min,共3次。每次处理后,应补充容器中损失的液体,加水至原来标记的缓冲液的高度。
(5)取出容器,冷却至室温。
(6)用PBS洗2次。
至此,准备就绪的样品可加入抗体染色。