在福尔马林固定的组织或细胞上进行操作免疫组化检测NiV特异性抗原是一种安全的NiV实验室检测技术。
本文来自实验室前沿
很多组织都可以用来进行免疫组化来检测NiV的抗原·。用纯化的NiV免疫兔而制备的兔抗血清和一些单克隆抗体进行免疫组化检测NiV特异性抗原。酶标第二抗体选用碱性磷酸酶标记的抗兔或者抗鼠的抗体。
免疫组化检测NiV特异性抗原有以下步骤。
①用福尔马林固定和石蜡包埋待测样品、阳性对照样品和阴性对照样品，并制作超薄切片放在载玻片上，每个样品至少制作2个玻片。然后进行脱腊：将这些载玻片放在二甲苯中浸泡3次，每次lmin；再将它们放在98％一100％乙醇中浸泡2次，之后用70％乙醇浸泡1次，再让自来水轻轻流过片子，以去掉残余的乙醇。
②将载玻片用蒸馏水洗后，浸没在含有0．1％胰蛋白酶(difco trysin 250)的0．01mol／L的CaCl2溶液中(用0．1mol／L的NaOH将pH值调到7．8)，37℃作用20min，再用蒸馏水洗。
③将载玻片平放在一个湿盒上，用PBS洗涤5min。然后每个片子加200ttI。3％的H：O：，室温下作用20rain，阻断内源性过氧化物酶。用PBS洗涤5rain。
④在含有每个样品的一套片子上加200uL用含0．1％脱脂奶的PBS适量稀释的兔抗NiV的血清，再含有每个样品的另一套片子上加2001d-用含0．1％脱脂奶的PBS适量稀释的兔抗其他无关病原的血清，37℃作用1h。
⑤用PBS洗涤5rain，然后每个片子加上2～3滴EnvisionTM：溶液(过氧化物酶标记的抗兔的抗体，DAKO公司生产)+将载玻片平放在一个湿盒上，37℃作用20rain。
⑥用200uL二甲基甲酰胺溶解2mg 3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)，再加入到10ml0．02mol／L的乙酸溶液中(pH 7．0)，然后加入5／lL H：02(30g／100m1)，轻轻摇匀即为底物溶液。底物溶液用阳性对照的片子进行检测。作用2～5min使充分染色，再用蒸馏水洗涤。底物溶液应该在使用前临时配制。
⑦用苏木素对片子进行反向染色1-3min，然后用自来水冲洗，再加入Scott溶液(0．04mol／lNaHCOa，0．3mol／LMgSO+)，然后用自来水仔细冲洗，再用蒸馏水冲洗，然后盖上盖玻片，里面加有水性封片剂。
⑧观察结果。阳性样品的细胞内中将看到棕红色颗粒沉积，它是病毒抗原存在的信号。细胞核是蓝色的，这便于观察组织细胞结构，并有助于识别病毒抗原在组织细胞中的位置。
