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流式细胞仪SOP程序(2)

时间:2009-12-10 01:25|来源:实验室前沿| 分享|点击:


未完全调整好之前不要去掉SETUP前的“”。
  7.在Detectors/Amps对话框中,调整FSC和SSC探测器中的信号倍增度:PMT voltages(粗调)与Amp  Gains(细调),使样品信号出现在FSC-SSC点图内,且三群细胞合理分布。
  8.在Threshold 对话框中选择适当的参数设定Threshold,并调整Threshold的高低,以减少噪音信号(细胞碎片)。一般做细胞表型时用FSC-H而做DNA时用FL2-H。Threshold并不影响检测器对信号的获取,但可改善画面质量。
  9.从屏幕左列绘图工具中选取Region(区域),并在靶细胞周围设定区域线,即通常所说的门。圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易。
  10.Detectors/Amps对话框中,调整荧光检测器(FL1, FL2, FL3,  FL4等)的倍增程度。根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群,使之分布在正确的区域内。
  11.在Compensation对话框中,根据所用的调补偿用标准荧光样品调整双色(或多色)荧光染色所需的荧光补偿。比如应该为FL1+ FL2-  的细胞群却分布在FL1+ FL2+区域内,则需调大FL2-?%FL1中的“?”,并从FL1-FL2点图中观察新的调整是否恰当
  12.在Status对话框中可见:Laser Power:正常值—Run/Ready为14.7mW,Standby为5mW;Laser current:正常值为6Amps左右。 实验室前沿,了解实验室动态
  13.调整好的仪器设定可在Instrument Settings对话框中储存,下次进行相同实验时可调出使用,届时只需微调即可。本计算机中已有三个名叫储存于FACStation G3 BD Applications CELLQuest Folder IMM-InstrSettings及FACStation G3 BD Files Instrument Settings Files CalibFile和Mast-Cell-Set的参数文件,前二者可用于分析人白细胞,后者用于分析小鼠肥大细胞。 copyright sysqy.com

四.通过预设的获取模式文件进行样品分析
  1.从苹果标志中选择CELLQUEST,新视窗出现后从File指令栏中选择Open,打开预设的获取模式文件。
  2.从屏幕上方Acquire指令栏中,选取Connect to Cytometer进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。
  3.从Cytometer指令栏中选取Instrument Settings,在其对话框中选择Open以调出以前存储的相同实验的仪器设定,按Set 确定。
  4.在Acquire指令栏中,选择Acquisition&Storage决定储存的细胞数,参数,信号道数。其中Resolution在做细胞表面标志时选择256,做DNA时选择1024。Parameter Saved…则根据不同的检测对象选择不同的参数。
  5.在Acquire指令栏中,选择Parameter  Description,以决定文件存储位置(folder),文件名称(file),样品代号以及各种参数的标记(panel),即安排tube1,2,3…的检测参数。一般本仪器获取的数据按照检测对象的不同分别储存于FACStation G3BD Applications CELLQuest IMM 和DNA 文件夹中。文件根据日期命名。
  6.在Cytometer指令栏中,选择Counters,将此对话框移至合适位置,以便于随时观察events计数。 sysqy.com
  7.将样品试管放至检测区,在Acquire Control对话框中选取Acquire以启动样品分析测定。
  8.微调仪器设定,待细胞群分布合适后选择Acquire Control对话框中Pause, Abort, 去除Setup前的“”,开始正式获取信号,存储数据。
  9.当一定数目的细胞被测定后,获取会自动停止,并会自动存储数据。重复步骤7,继续分析下一个样品,直到所有的样品数据分析完毕。
     当所有样品分析分析完毕,即换上三蒸水,并将流式细胞仪置于“STANDBY”状态,以保护激光管。 实验室前沿,了解实验室动态

Tags:程序,细胞,对话,获取,选择,调整,模式,文件,分析,进行,
责任编辑:何辉

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