培养基、无菌水的制备
①基本原理
培养基的种类很多,不同微生物所需要的培养基不同。培养基制成后的物理状态可分为液体、固体、半固体三种类型,我们实验室常用的是固体培养基。
②器材
三角瓶、试管、烧杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、铝箔纸、药勺、杜氏小管、硅胶塞(棉塞)、电炉
② 培养基的种类
营养琼脂培养基、乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、伊红美兰琼脂培养基等
③ 方法步骤
A. 培养基的制备:
a) 称量:根据培养基的配方,称取适量药品于搪瓷杯中;
b) 溶解:用量筒量取所需水量,置电炉上加热,一边搅拌,至完全溶解,加热至沸腾,拔掉电源,待冷却;
c) 分装:根据不同需要,立即趁热分装入三角瓶或试管中,分装三角瓶以不超过三角瓶一半为宜,分装试管一般为管长的1/5(需根据试管的大小而定)。液体培养基如乳糖胆盐发酵培养基约分装10毫升左右。
d) 塞橡胶(棉)塞:装好培养基的试管应塞上橡胶(棉)塞,松紧合适,紧贴管壁,不留缝隙,约1/2塞入内,这样即可过滤空气,避免杂菌侵入,又可减缓培养基水分的蒸发。
e) 包装:三角瓶棉塞头部应用锡箔纸包扎,试管集中于试管篓。
B. 无菌水的制备:
a) 用10ml移液管量取9.0ml蒸馏水(稀释水)装入试管中。
b) 用250ml量筒量取225ml蒸馏水(稀释水)装入250ml的三角瓶中,可置少许玻璃珠于三角瓶内,塞上橡胶(棉)塞用牛皮纸包扎好,高压灭菌备用。