一、目的
明确人巨细胞病毒核酸检测的操作规程，指导检验人员正确进行人巨细胞病毒核酸的检测。 本文来自实验室前沿
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二、适用范围
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适用于进行人巨细胞病毒核酸定量检测的检验人员。 内容来自实验室前沿网站
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适合仪器：RG3000荧光PCR检测仪 内容来自实验室前沿网站
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方法原理：采用PCR方法结合荧光探针的扩增技术 本文来自实验室前沿
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样品要求：血清 copyright sysqy.com
三、职责
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实验操作人员应严格按操作规程进行实验。
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种类：新抽取的血清。 实验室前沿，了解实验室动态
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保存：待测血清在2-8℃保存,保存期不超过24小时；在-20℃保存不超过三个月；- 70℃保存，保存期半年。 本文来自实验室前沿
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最少样品量：100ul 内容来自实验室前沿网站
试剂及配套品：
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样本处理试剂：DNA提取液1、DNA提取液2 内容来自实验室前沿网站
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核酸扩增试剂：PCR反应液、Taq酶(5U/ul)、UNG(1U/ul)
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对照品： 阴性对照、阳性对照
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阳性参控品： 阳性参控品1：(5-9)E7copies/ml 本文来自实验室前沿
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阳性参控品2：(5-9)E6copies/ml 实验室前沿，了解实验室动态
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阳性参控品3：(5-9)E5copies/ml 本文来自实验室前沿
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阳性参控品4：(5-9)E4copies/ml
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四、工作程序
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1. 样本处理(样本处理区) 内容来自实验室前沿网站
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取待测样本血清以及试剂盒中的对照品各100ul，分别加到0.5ml离心管中；加入100ul DNA提取液1，振荡混匀，13,000rpm离心10min，弃上清；再加入50ul DNA提取液2，稍事振荡并将液体甩至管底，放入100℃干浴或沸水浴10min， 实验室前沿，了解实验室动态
13，000rpm离心10min，保留上清4℃保存备用(如需长期保存请放置于-20℃)。
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2. 核酸扩增
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2.1 试剂配置(PCR前准备区)
从试剂盒中取出各管试剂,稍事离心.设所需要的管数为n(n=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照+4管阳性参控品)，每个测试反应体系配制如下表： 内容来自实验室前沿网站
试剂 PCR反应液 Taq酶 UNG 实验室前沿，了解实验室动态
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用量 15.6uL 0.4uL 0.03ul 内容来自实验室前沿网站
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积试管中，充分混合均匀，向设定的n个反应管中分别加入16ul，转移至样本处理区。 copyright sysqy.com
2.2 加样(样本处理区) 本文来自实验室前沿
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在所设定的n个反应管中分别加入步骤1中处理过的样本、阴性对照、强阳性对照上清液以及阳性参控品各4ul，盖紧管盖，将反应管套放在离心机中，于2000rpm离心5sec，转移至检测区，置于RG3000-PCR仪上并纪录样本摆放顺序。 copyright sysqy.com
2.3 PCR扩增(检测区) 内容来自实验室前沿网站
2.3.1 循环条件设置：
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37℃：3min； copyright sysqy.com
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93℃：1min；
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93℃：5sec，60℃：40sec，40个循环。
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2.3.2 仪器检测通道选择 内容来自实验室前沿网站
选择F1通道；在60℃时荧光信号收集方式设为“SINGLE”。 实验室前沿，了解实验室动态
结果判断：
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1. 检测样本中1E3copies /ml≤HBV DNA≤1E8copies /ml，测定结果有效，可直接报告相应的拷贝数；
2. 检测样本中HCMV DNA < 1E3copies/ml时,均报告为< 1E3copies/ml
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3. 检测样本中HCMV DNA = 0copies/ml时，报告为<最低检出限. 内容来自实验室前沿网站
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五、支持性文件 copyright sysqy.com
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《人巨细胞病毒核酸扩增荧光检测试剂盒操作说明书》
