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嗜酸性粒细胞直接计数操作规程SOP

时间:2010-12-05 01:11|来源:实验室前沿| 分享|点击:


1. 实验原理:

血液经嗜酸性粒细胞稀释液稀释,嗜酸性粒细胞在含有石楠红B溶液中被染成红色,而红细胞及其他白细胞破裂或榕解,有时少数并未破坏,但不被伊红着色。充入计数池后,在显微镜下计数嗜酸性粒细胞,换算出每升血液中嗜酸性粒细胞数量。
2. 标本采集:
2.1 标本种类:新鲜抗凝血或手指末梢血
2.2 标本要求:
2.2.1 抗凝剂采用EDTA-K2抗凝
2.2.2 用手指末梢血作白细胞检验时,最少样品量为200ul,如手指有冻疮,则主张采用耳垂血。
3. 标本储存:2小时内完成检验,室温放置下不超过8小时,4-8℃保存不超过48小时。
4. 标本运输:室温运输
5. 标本拒收标准:污染,凝固标本不能作测定
6. 试剂
嗜酸性粒细胞稀释液
丙二醇(Propyleneglycol)         50 ml
蒸锢水                        50 ml
10 g/L石南红B水熔液           10 ml
100g/L碳酸纳水溶液             1.0ml
混匀,过滤后室温中保存,可用一个月。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称: OLYMPUS 显微镜
7.2 仪器厂家:OLYMPUS
7.3 仪器型号:OLYMPUS CHK-F200A
7.4改良Neubauer血细胞计数板。
8 操作步骤
1.取小试管l支加入嗜酸性粒细胞稀释液0.38 ml。
2.取末梢血20μl加入试管内棍匀,待红细胞溶解后在计数板内两侧充池。
3.静置3-5min,用低倍镜,必要时在高倍镜下计数,统计两个计数室中10个大方格内嗜酸性粒细胞数。
9. 计算:嗜酸性粒细胞/L=10个大方格内嗜酸性粒细胞数×20×106
10. 附注
1.血液稀释后应于1h内计数完毕,否则嗜酸性粒细胞会逐渐被破坏,使结果偏低或不易辨认。
2.充池前要充分混匀,但不宜用力过猛。
3.注意与中性粒细胞区别,以免误认。中性粒细胞一般不着色,但也有着浅红色的,其颗粒较小。
4.如嗜酸性粒细胞较少时,应增加计数面积。
5.住院患者采集标本时间力求统一,以免受日间生理变化的影响。
6.用白细胞总数与分类百分数求得的绝对数不如直接计数结果准确。
11. 参考区间:
 (50-300×106/L
12. 临床意义:
1.直接计数主要用于观察传染病、手术和烧伤患者的预后及测定肾上腺皮质功能。2.其他变化同自细胞分类计数中嗜酸性粒细胞临床意义。
13. 参考文献
13.1 叶应妩,王毓三,等,全国临床检验操作规程,第三版,中华人民共和国卫生部医政司,2006
13.2刘成玉主编﹒临床检验基础实验指导﹒第二版·人民卫生出版社,2003
Tags:操作,计数,直接,粒细胞,标本,稀释,仪器,ml,1.,细胞
责任编辑:何辉

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