血清学试验是抗原抗体在体外出现可见反应的总称,故又称抗原抗体反应。它可以用已知抗体(细菌抗血清)检测未知抗原(待检细菌);也可用已知抗原(已知病原菌)检测患者血清中的相应抗体及其效价,是临床诊断、实验室研究和细菌学鉴定的重要手段之一。 本文来自实验室前沿
(一)凝集试验
1.玻片法常用于鉴定菌种及菌型,如葡萄球菌、肺炎链球菌、沙门菌属、志贺菌属、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、脑膜炎奈瑟菌等的鉴定。
(1)原理:用已知的诊断血清或血浆在玻片上与待检菌及生理盐水混合,若出现肉眼可见的特异性凝集块,表示该菌为相应的细菌。
(2)方法:取一洁净载玻片,用接种环取待检菌培养物,分别与诊断血清及生理盐水混匀,上下摇动玻片数次,l~3min后观察结果。
(3)结果判断:阳性一待检菌明显凝集,对照菌均匀混浊。阴性一待检菌及对照菌均匀混浊。自凝一测定菌、对照菌均凝集。
(4)注意事项:某些细菌菌体表面常有一层表面抗原,如伤寒沙门菌的vi抗原及志贺菌属的K抗原等。它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集,从而导致假阴性结果。此时应将菌悬液于100℃中煮沸1h,以破坏其表面抗原,然后再做试验。
2.试管法 此法可排除玻片法凝集试验的非特异性凝集,是一种半定量凝集试验。
(1)方法:取小试管10支,第1管加入生理盐水0.45ml,再加入0.05ml诊断血清混匀,其余各管均加生理盐水0.25m|,然后从第1管中吸出0.25ml加入第2管中,混匀后再吸出0.25ml加入第3管,依次类推至第9管,从第9管吸出0.25ml弃去,第l0管不加抗血清为对照管。每管加待检菌菌液0.25ml,充分震荡混匀后,置37℃水箱浴中4h,再置4℃中过夜。
(2)结果判断:以血清最高稀释度达到(++)凝集者(管内液体澄清,部分凝集块沉于管底)为该菌的凝集效价。若此效价所用原诊断血清效价一半以上者为阳性。
(3)注意事项:脑膜炎奈瑟菌的菌液必须经56℃30min灭活,以破坏自溶酶。若试验出现低凝集结果时,应将该菌传代数次后,再作试验。
(二)荚膜肿胀试验
常用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌和炭疽芽胞杆菌等细菌的检测和荚膜分型。
(1)原理:特异抗血清和相应荚膜细菌相互作用,使细菌的荚膜明显增大,细菌的周围有较宽的环状带。
(2)方法:取洁净玻片两侧各加待检菌1~2接种环,一侧加抗细菌荚膜血清,另一侧加正常血清各1~2接种环,混匀;两侧各加1%美蓝水溶液l接种环,混匀,分别加盖玻片,放置于湿盒中5~10min,镜检。
(3)结果判断:阳性——镜下观察在蓝色细菌周围可见厚薄不等,边界清晰的无色环状物,而在对照侧则无此现象。阴性——试验和对照侧均不产生无色环状物。