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白细胞的纯化操作方法

时间:2011-10-11 00:33|来源:实验室前沿| 分享|点击:


1.低渗处理法

【试剂及配制】
(1)蒸馏水
(2)1.8%氯化钠溶液
【操作方法】
(1)     上述各种方法所得白细胞悬液中加入1ml蒸馏水,轻轻地震荡20s,使混杂的红细胞裂解;
(2)     加等量1.8%氯化钠溶液,调至等渗;
(3)     再加Hank’s溶液混匀,离心沉淀,反复两次;
(4)     取末次沉降细胞配成所需浓度的白细胞悬液。
 2.氯化铵处理法
【试剂及配制】
(1)         Gey溶液母液A: 称取35.0g NaCl, 1.85g KCl, 1.5g Na2HPO4.H2O,0.119g KH2PO4,5.0g 葡萄糖,和50mg 酚红,并将上列各物溶于1000ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。如果用NH4Cl 35.0g代替NaCl,补优质明胶5g,即为溶血用的Gey溶液的母液A。
(2)         Gey溶液母液B:称取0.42g MgCI2.6H2O,0.14g MgSO4.7H2O,O.34g CaCl2,并将上列各物溶于100ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。
(3)         NaHCO3溶液:称取2.25g NaHCO3,溶于100ml蒸馏水中,10磅高压蒸汽灭菌15min。
(4)         Gey应用液:取母液A 20ml,蒸馏水70ml及母液B 5ml,混合后加NaHCO3溶液5ml即成。
【操作方法】
(1)         在白细胞悬液中加入含氯化铵的Gey应用液1ml,轻摇2min,使红细胞裂解;
(2)         加入等量的不含氯化铵的Gey应用液,离心,取沉淀细胞配成白细胞悬液。
【注意事项】
用上述诸法所得细胞悬液,含有较多粒细胞、单核细胞和血小板,而淋巴细胞纯度约为60~67%。
Tags:方法,操作,细胞,Gey,白细胞,15min,加入,蒸汽,水
责任编辑:何辉

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