一、概 述
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(一)病理医师根据病理学诊断、教学和研究的需要确定病理学摄影的内容,进行客观、准确的图像记录。 本文来自实验室前沿
(二)病理学摄影的客体包括:①患者体表病征,②大体标本(手术切除和尸检标本的肉眼病变),③组织学切片(光学显微镜下病变),④超薄切片(透射电子显微镜下超微病变),⑤冷冻蚀刻标本(扫描电子显微镜下超微病变),⑥细胞培养标本,⑦细胞和分子细胞遗传学检测结果,⑧尸检过程,⑨动物实验标本和⑩文字、图像资料翻拍等。
二、普通摄影 sysqy.com
(一)普通摄影是应用普通照相机拍摄客体的图像,包括患者体表病征,大体标本的肉眼病变,尸检过程,动物实验标本和文字、图像资料等。摄影时应注意病征或病变显示、光照、角度等,适度调节距离、光圈、速度。 copyright sysqy.com
(二)患者体表病征摄影 copyright sysqy.com
1.需征得患者或患方有关人员同意。 实验室前沿,了解实验室动态
2.应遮盖患者的面容和隐私部位。 copyright sysqy.com
(三)大体标本摄影
1.于标本下面铺垫色泽反差鲜明、协调的平整背景(纸或布),并需置放标尺和相关标本的病理号,必要时添加箭头等符号标志指示重点部位。
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2.因照相机固定于翻拍机上,宜选用较慢的快门速度,以增加景深。 copyright sysqy.com
(四)尸检过程摄影
1.宜用28~135mm变焦镜头的135相机进行摄影。 实验室前沿,了解实验室动态
2.重要病变的原位摄影:应包括局部肉眼病变特征(“近拍”)及其与毗邻结构的解剖关系(“全景”),突出重要病变,兼顾显示全貌。 本文来自实验室前沿
3.离体标本摄影[参见上文:“(二)大体标本摄影”]
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(五)文字、图像资料翻拍 sysqy.com
1.应用翻拍机进行摄影。
2.在翻拍相机的两侧一般至少安装2~4盏100W灯光,与照明直线呈45º角,以使光线均匀。摄影条件可用测光表确定。 copyright sysqy.com
(六)底片的选择
1.黑白摄影:扩印照片者,可用ASA100速度底片;制作幻灯片者可用ASA25~50速度底片。 copyright sysqy.com
2.彩色摄影:
(1)用日光型彩色底片摄影时,需用雷登80系列平衡滤色片把色温调到5600ºK状态;用灯光照射者,无需平衡滤色片。 本文来自实验室前沿
(2)用灯光型彩色底片在日光下摄影时,需用平衡滤色片把色温调到3200ºK状态。 sysqy.com
三、光学显微镜(光镜)摄影 copyright sysqy.com
(一)光镜显微摄影是应用显微照相机拍摄通过光学显微镜放大40~1000倍的客体图像。 实验室前沿,了解实验室动态
(二)摄影用显微镜性能要求
1.具有摄影目镜筒。
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2.能通过目镜筒对图像进行对焦。
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3.具有光镜选择移动杆。 内容来自实验室前沿网站
4.物镜具有分辨率良好平视场象。
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5.聚光镜具有孔径光阑和调节光轴中心的机构。 copyright sysqy.com
6.具有视场光阑。 sysqy.com
7.光源亮度足够,电压可以调节。
8.具有插入滤色镜的槽口。
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(三)显微摄影的基本装置
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1.具有自动输片机构的35mm照相机背。
2.具有对不同光照条件进行光路调节的调节杆。 实验室前沿,了解实验室动态
3.具有能对不同标本面积进行自动测光的装置。 内容来自实验室前沿网站
4.具有与显微镜相连接的接圈、平场消色差物镜(Splan,Dplan)和聚光镜。
5.具有显微摄影控制台。目前较常用的有日产Olympus PM-10及PM-20等显微摄影装置。常用参数项目包括:①快门按钮(EXPOSE),②底片类型选择键(FORMAT),③感光度旋钮(ASA/ISO),④倒易律失效的补偿旋钮(RECIPROCITY),⑤曝光增减旋钮(EXPOSURE ADJ),⑥快门速度调节旋钮(MODE/EXPOSURE TIME),⑦卷片按钮(OFF/MINDING),⑧停片进片按钮(NO WINDING),⑨自动曝光锁按钮(AEOCK),⑩时间回忆按钮(TIME RECALL)。 copyright sysqy.com
(四)显微摄影要点 实验室前沿,了解实验室动态
1.显微照相机必须安放稳定,具有一定防震性,室内光线应暗些以避免散射光进入目镜。 copyright sysqy.com
2.选择适当的彩色或黑白底片装入照相机身(暗盒)。拍摄常规HE染色、特殊染色、免疫组化染色切片的病变,宜用感光度ASA为100的彩色或黑白底片;拍摄培养细胞和免疫荧光染色标本,宜用感光度ASA为400的彩色或黑白底片。 实验室前沿,了解实验室动态
3.调节照明和光照 实验室前沿,了解实验室动态
(1)打开电源,调节电压(约在9伏)。 内容来自实验室前沿网站
(2)视场光阑收缩到取景框边缘外。
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(3)孔径光阑调到物镜孔径数值的60%~80%,例如孔径为0.25的10×物镜,聚光镜上光阑应调到:0.25×60%~80%=0.15~0.2。
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(4)光通路调节
①常规摄影:先将视野与照明合轴、再将聚光镜调中,使光线同时调到①观察目镜和②取景目镜的视野之中,以便于边观察边曝光摄影。如图像分布均匀,将曝光增减旋钮(EXPOSURE ADJ)调至“1”处。
②暗视野、荧光和偏振光摄影:将光线100%调到取景目镜的视野之中,用调焦镜观察视野中的标本图像,进行摄影。如图像分布不均匀,应将曝光增减旋钮调于0.25~4之间。 实验室前沿,了解实验室动态
4.调节和校准取景目镜于标准状态:旋转调焦镜镜筒上的圆环,使取景框中央的双十字线达到最清晰。
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5.将切片等标本放置在载物台上,先用观察目镜选定摄影图像,再用取景目镜调整摄影图像,并转动微调旋钮,同时使图像与取景框中的双十字线像达到最清晰。
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6.用彩色底片摄影时,必须用色温计调节色温:①将光通路100%到达色温计上(由调焦镜中看不到光线);②观察色温指示表,用平衡滤色镜(使用日光型底片时用雷登80系列)和灯光亮度将色温调至最佳色温点(日光型底片的色温点为5600K左右,灯光型底片的色温点定为3200K左右) 本文来自实验室前沿
7.用黑白底片摄影时,必须按下列对应关系选择滤色片以提高图像反差和清晰度:
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标本颜色 红 橙 黄 绿 深蓝 实验室前沿,了解实验室动态
滤 色 镜 蓝、绿 蓝、绿 蓝 红、蓝 深绿、橙 内容来自实验室前沿网站
8.检查光线可达到底片的位置,确定正确的曝光时间和进行曝光;或用自动摄影控制台上的按键曝光。 内容来自实验室前沿网站
9.记录图像的摄影日期、摄影编号、样品编号、放大倍数、内容、摄影条件和备注等。 内容来自实验室前沿网站
10.将已全部摄影过的底片退回底片暗盒内,取出底片并进行暗室冲洗等后期处理。 本文来自实验室前沿
四、电子显微镜(电镜)摄影
(一)透射电镜摄影
1.检查电镜工作状态,确认样本无漂移现象,选择好曝光条件。
2.调节好灯丝像,消正像散。
3.选择视野,确定放大倍数。 sysqy.com
4.调整物镜光阑:样品反差较强时,使用较大的物镜光阑孔,直至反差适中为止;反差小时,宜用较小的光阑孔。
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5.样本聚焦在低倍电镜(<1500倍)图像时,可采用摇摆聚焦法用肉眼定位;样品聚焦在高倍电镜(>1500倍)图像时,除用肉眼观察定位外,还需采用系列拍照法:于确定焦点后,用细调钮聚焦,增加物镜电流,每调动一级最小钮拍摄一张底片,总计拍摄4~5张,从中选择最佳底片。
6.放平荧光屏,传送底片使之进入摄影位置。 内容来自实验室前沿网站
7.调定曝光亮度和速度,然后启动快门进行曝光;曝光结束后,将底片送入储存盒内。将底片全部摄影的储存盒取出,进行暗室冲洗等后期处理。 实验室前沿,了解实验室动态
8.用于透射电镜摄影的底片一般为色盲片(对红光不感光),曝光时间为2~4s,ASA[中文?]为8~25s。