实验室前沿——做中国最专业实验室前沿资讯网

现在的位置:主页 > 实验技术 > 医学实验室 > PCR室 >

PCR法检测猪链球菌病技术方法

时间:2011-04-09 01:18|来源:实验室前沿| 分享|点击:


 PCR法检测猪链球菌病 

本文来自实验室前沿

    (1)PCR法  Smith等针对猪链球菌主要致病菌株利用荚膜生物合成基因的DNA序列特性建立了血清型特异性PCR鉴定方法。他们设计了3对引物:
    CPS2J primers  5’-CAAACGCAA GGAA TTACGGTA TC-3’,
    CPS1I primers  5’-GA GTA TCTAAA GAA TGCCTA TTG-3’
    CPS9H primers  5’-GGCGGTCTAGCAGAA TGCTCG-3’,
 
    利用CPS-J引物进行PCR鉴定,可以检测出2型和1型或2型;利用CPSlI引物进行PCR鉴定,可以检测出1型和14型;利用CPS9H引物进行尸CR鉴定,可以检测出9型。
 
    马清霞、何孔旺、陆承平等根据相关文献设计并合成引物,建立了能同时检测猪链球菌2型(cps)及其重要毒力因子溶菌酶释放蛋白(mrp)和细胞外因子(印f)的多重PCR方法。目的片段的大小分别885bp(mrp)、675bp(cps)和443bp(epf)。对参考菌株、人工攻毒病料和临床收集病料的检测结果显示,该多重PCR法特异性强、敏感性高,可直接从临床病料中检测出猪链球菌2型i并能鉴定其毒力因子表型。
 
    倪艳秀等(2002)根据猪链球菌2型的荚膜多糖抗原基因cps-j,合成1对可扩增长度为675bp目的片段的引物,对9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌2型的菌株进行了检测,均呈阳性;同时,用此法对88份正常猪的扁桃体样品的细菌分离物进行了检测,36份呈阳性;同时用玻片凝集试验进行对照检测,36份也呈阳性。此法不需进行细菌的纯分离培养,即可用于猪链球菌2型的快速诊断以及流行病学调查,特异性强。
 
    何孔旺等用PCR方法检测2型猪链球菌两种毒力因子(MRP和EF),其检测的敏感度可达100个细菌。他们用建立的PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测,检测的15株2型分离株中有13株MRP和EF,均呈阳性,为典型的高毒力表型菌株(MRP+EF+),其余1株为MRP+EF-,1株为MRP-EF-
 
    (2)猪链球菌做随机扩增多态性DNA(RAPD)分型研究  宁宏波等利用100条10聚核苷酸随机引物对分离的20株猪链球菌做随机扩增多态性DNA(RAPD)分型研究,有27条引物呈现良好的多态性和稳定性,产生稳定、复杂的指纹图谱。通过SPASS 10.0软件分析了不同菌株之间的遗传距离,把20株猪链球菌分成4个聚类群。从分子水平上确立了该病的流行病学调查方法,同时为该病的防治提供了理论依据。
 
    (3)猪链球菌荧光PCR快速检测方法  由北京检验检疫局和中国兽医药品监察所共同研制成功的猪链球菌荧光PCR快速检测技术(2006),具有快速、敏感、特异、安全等显著优点,此检测技术将检测时间缩短为1.5h。此方法的问世,为我国开展猪链球菌检测提供了技术支持。该技术不仅可用于活猪检测,还可用于猪肉及其产品的检测。
 
    同时,于新和等利用自制荧光抗体进行链球菌病的诊断,可在2~3h内对链球菌作出诊断,比直接镜检具有更好的特异性和敏感性。
Tags:方法,技术,检测,PCR,进行,利用,同时,鉴定,MRP,E
责任编辑:何辉

最新更新

点击排行

更多阅读者

其他人正在阅读