【材料和试剂】 （1）真空泵 （2）PEG/NaCl溶液 （3）碘化物缓冲液 （4）70%乙醇 （5）TE缓冲液 10mM Tris-HCl，pH 8.0； 1mM EDTA 【操作步骤】 （1）扩增噬斑（见上述），在第一次离心后，将500ml含有噬菌体的上清转入新的离心管中。 （2）加入200ml PEG/N...[阅读全文]

在宿主细胞过量的情况下，噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因，在感染以前，要将噬菌体进行稀释，而不是将宿主细胞稀释。以低MOI（感染重复性）铺板，也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA序列。 【材料和试剂】 （1）微波炉 （2）LB/IPTG/Xgal...[阅读全文]

野生型p53蛋白可以通过诱导凋亡而抑制肿瘤的生长，突变型p53基因丧失了诱导细胞凋亡的能力，从而增强了细胞的恶性转化能力，而且在恶性肿瘤常可检测出突变型p53基因。p53蛋白也可能参与化疗药物诱导的细胞凋亡。本法运用一步夹心免疫法，定量检测野生型或突...[阅读全文]

免疫荧光单标记方法 免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。 1)所需材料与试剂 (1)培养在盖玻片或...[阅读全文]

甲基化荧光检测(methylight)是利用荧光定量性PCR检测亚硫酸氢钠处理后的序列改变。在TaqManR技术中，可以使用3种不同的单核苷酸(正义引物、反义引物和荧光杂交探针)，进行不同序列的检测。与已存在的技术相比，甲基化荧光检测最明显的优点就是能同时对几百甚...[阅读全文]

蛋白质组学研究主要依赖于大规模高通量分离和分析技术的进步，目前最成熟、最有效的技术仍然是双相凝胶电泳分离生物质谱鉴定技术，即首先用双相凝胶电泳分离纯化蛋白质，结合计算机软件分析得到电泳图谱，再进一步用生物质谱技术对分离出的蛋白质进行鉴定，...[阅读全文]

酵母双杂交系统是在真核生物酵母中研究活细胞内蛋白质相互作用的技术，具有很高灵敏度，对蛋白质之间微弱和瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测到。酵母双杂交系统的建立基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转...[阅读全文]

对分离的蛋白质进行鉴定是蛋白质组研究的重要内容，蛋白质微量测序、氨基酸组成分析等传统的蛋白质鉴定技术不能满足高通量和高效率的要求，生物质谱技术是蛋白质组学的另一支撑技术。 生物质谱技术在离子化方法上主要有两种软电离技术，即基质辅助激光解吸电...[阅读全文]

荧光色素的荧光光谱和量子产率受环境影响，这也是众多荧光素具有探针作用的基...[阅读全文]

考马斯亮蓝染色法标准方法 1．电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝胶体积的0．25％考马斯亮蓝R250(溶解于50％甲醇和10％乙酸中)。 2．室温下振摇温育4h至过夜。 3．去除染色液，收集保存可重复使用20～40次。 4．依次在25％甲醇、7．5...[阅读全文]