肉毒梭菌中毒诊断采样，要采取病人或病畜的血清和粪便、可疑食物、饮料或饲料水以及土壤等；如为创伤感染，除可采取血清、粪便外，还可采取创伤局部的渗出液、切除组织等。最好能采得血清10ml以上；食品、饲料、粪样、土壤等25～50g。

 

    固体检样取来后，应浸于等量无菌磷酸盐一明胶缓冲液中(明胶29g磷酸氢二钠4z，蒸馏水1000ml，pH6．2。高压灭菌后贮于4~C备用)，迅速送检。灌肠、火腿、罐头肉晶等检样取来切成小块，与等量磷酸盐-明胶缓冲液研磨成匀浆，供接种用。

 

    2．增菌培养

    可选用庖肉培养基、肝块肉汤、TPGY肉汤和改良的厌氧菌培养基。具体操作方法为，先将培养基隔水煮沸10一15min，驱氧并迅速冷却。以1～28固体检样或1～2mi检样乳悬液接种2管增菌培养基中，置35~C培养。同时如法再接种2管置于26~C培养。5天后观察培养物浑浊度，有无气体产生，气味及肉渣的消化情况，并涂片镜检，此时可检测毒素。

 

    3．分离培养

    可选用葡萄糖血琼脂、脑、心浸汤琼脂、D-环丝氨酸血琼脂、肝-肉-蛋黄琼脂等。具体操作是待增菌培养物中芽抱生长最旺时期，可取1-2ml出现芽孢的培养物置于小试管中。加等量滤过灭菌的乙醇，混匀，放置室温中1h，再划线于分离平板上，厌氧环境下35~C培养48h后观察。血平板上可产生溶血环。菌落边缘不齐，灰白色，表面粗糙如毛玻璃样，4天后菌落直径可达到5-10mm。庖肉基中A型、B型、F型菌可消化肉渣，变黑并有腐败恶臭味。

 

    4．鉴别培养 

    J，C Silas(1985)介绍，将分离菌的生长物划线或点种于肉毒梭菌鉴别培养上，在厌氧环境中37~C培养24-48h后，用噻嗪红染色5min，继之用3％冰醋酸冲洗，观察菌落周围的沉淀反应，生成红色晕环者为肉毒梭菌。

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