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噬菌体滴度的测定操作规程

时间:2012-04-10 23:39|来源:实验室前沿| | 分享|点击:


在宿主细胞过量的情况下,噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因,在感染以前,要将噬菌体进行稀释,而不是将宿主细胞稀释。以低MOI(感染重复性)铺板,也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA序列。

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【材料和试剂】
(1)微波炉
(2)LB/IPTG/Xgal培养板
(3)LB培养基
(4)顶层琼脂糖凝胶
 
【操作步骤】
(1)在5~10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆,振摇孵育直至对数生长中期(OD600~0.5)
(2)在细胞生长时,微波融化顶层琼脂糖凝胶,分装至无菌培养管内,每管3ml。维持在45℃备用。
(3)37℃预热LB/IPTG/Xgal培养板,备用。
(4)以LB培养基10倍比稀释噬菌体。
    建议稀释范围:对扩增的噬菌体培养上清,108-1011;对未扩增的筛选洗脱液,101-104。每次稀释都换用新的加样枪头,最好使用气溶胶阻隔枪头以避免交叉污染。
(5)一旦ER2537培养物长至对数生长中期,分装至微量离心管中,每管200ml。
(6)将倍比稀释的噬菌体上清加入含细菌培养物的微量离心管中,一支微量离心管中仅加入一种稀释液10ml,快速涡旋,室温孵育1-5min。
(7)转移至含有45℃顶层琼脂糖凝胶的管中,快速涡旋混匀,立即倾倒至预热的LB/IPTG/Xgal平板上,轻缓摇动平板使顶层胶均匀分布。
(8)冷却平板5min,37℃倒置培养过夜。
(9)噬斑计数以噬斑数为100左右的平皿为准,噬斑数乘以稀释度即可获得每10ml噬菌体的滴度-噬斑形成单位(pfu)。
Tags:操作规程,测定,滴度,噬菌体,
责任编辑:何辉

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