在宿主细胞过量的情况下，噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因，在感染以前，要将噬菌体进行稀释，而不是将宿主细胞稀释。以低MOI（感染重复性）铺板，也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA序列。 sysqy.com
【材料和试剂】
（1）微波炉
（2）LB/IPTG/Xgal培养板
（3）LB培养基
（4）顶层琼脂糖凝胶
【操作步骤】
（1）在5~10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆，振摇孵育直至对数生长中期（OD600~0.5）
（2）在细胞生长时，微波融化顶层琼脂糖凝胶，分装至无菌培养管内，每管3ml。维持在45℃备用。
（3）37℃预热LB/IPTG/Xgal培养板，备用。
（4）以LB培养基10倍比稀释噬菌体。
建议稀释范围：对扩增的噬菌体培养上清，108-1011；对未扩增的筛选洗脱液，101-104。每次稀释都换用新的加样枪头，最好使用气溶胶阻隔枪头以避免交叉污染。
（5）一旦ER2537培养物长至对数生长中期，分装至微量离心管中，每管200ml。
（6）将倍比稀释的噬菌体上清加入含细菌培养物的微量离心管中，一支微量离心管中仅加入一种稀释液10ml，快速涡旋，室温孵育1-5min。
（7）转移至含有45℃顶层琼脂糖凝胶的管中，快速涡旋混匀，立即倾倒至预热的LB/IPTG/Xgal平板上，轻缓摇动平板使顶层胶均匀分布。
（8）冷却平板5min，37℃倒置培养过夜。
（9）噬斑计数以噬斑数为100左右的平皿为准，噬斑数乘以稀释度即可获得每10ml噬菌体的滴度-噬斑形成单位（pfu）。
![嗜中性粒细胞来袭时的微细胞之战[图]](/uploads/allimg/090616/02113V132-0_lit.jpg)
