器材和试剂的准备 TAE缓冲液:40 mm01/L Tris-乙酸,1 mm01/L乙二胺四乙酸(EDTA);调pH至8.0,高压灭菌 TAE/琼脂糖凝胶:TAE缓冲液,1%(w/v)琼脂糖,1:5000(体积比)10%溴化乙锭 2YT培养基:10g细菌用酵母提取物,16g细菌用胰蛋白,5g NaCl;加水到1L并用...[阅读全文]
基于噬菌粒系统来生产高多样性的噬菌体展示文库,下面的方法已被优化。进行一些小的修改后,这些方法也适用于基于噬菌体的展示系统。特别的,噬菌粒需要额外的辅助噬菌体(helperphage)来包装DNA到噬菌体颗粒中,噬菌体载体常常自我包装。 1 单链DNA模板的制...[阅读全文]
[器材和试剂] ● 2YT/tet培养基 ● 超级肉汤(Superbroth)/tet培养基: 24g细菌用酵母提取物,12g细菌用胰 蛋白胨,5m1甘油,加水至900ml,高压灭菌;加100mi经过高压灭菌的0.17mol/LK2HP04 0.72m01/L KH2P04 和5ug/m1的四环素 ● 经过过滤灭菌的用超...[阅读全文]
在印迹膜经过处理可用于抗原检测之前,须再进行封闭以防免疫试剂的非特异性吸附。检测过程是连续进行的。将印迹膜与一定浓度的蛋白质或去污剂溶液孵育可实现封闭。然后通过抗体与在固定膜上的蛋白质结合来定位抗原。抗原可用易识别的示踪剂标记的抗体进行检...[阅读全文]
丽春红S适用于酸性水溶液,染色快但不持久,在后续处理中红色染料易被洗去。由于与蛋白质的结合是可逆性的,该染色法适合用于所有显示抗原的技术。因此,丽春红S可以常规用来验证转印以及定位分子量标记物或其他内参照。然而,该染色法不太灵敏,也很难以图...[阅读全文]
若在同一标本中有A和B两种抗原需要同时显示,A抗原的抗体用FITC标记,B抗原的抗体用TRITC标记,可采用以下染色方法: 原代培养胚胎14天大鼠端脑细胞:在骨发生形态蛋白{诱导下,乙酰胆碱转移酶(呈绿色荧光)和同源域蛋白Islet1(呈红色荧光)共存于细胞质内(激...[阅读全文]
[检测方法] ELISA法 [方法学原理] 将血吸虫可溶性抗原与固相载体联结形成固相抗原,加待检血清,如血清中有特异性抗体则与固相抗原相结合,形成固相抗原抗体复合物;再加HRP标羊抗人IgG抗体,形成固相抗原抗体羊抗人IgG酶标记抗体复合物,在此基础上加酶底物...[阅读全文]
立克次体(Rickettsia)是一类专性活细胞内寄生的原核细胞微生物,具有细胞壁,含有RNA和DNA,以二分裂繁殖。需在细胞内繁殖,不能在无细胞的人工培养基中生长。它是属于人兽共患的自然疫源性疾...[阅读全文]
器材与试剂的准备 洗涤缓冲液 结合缓冲液 辣根过氧化物酶(HRP)连接的抗M13单克隆抗体(mAb) (Amersham Biosciences) HRP底物㈠OPD(邻苯二胺,o-phe-nylenediamine) (Sigma)或ATBS 【2,2-连氮基-双-(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺 酸),2,2-azinobis(3-ethylbenzo...[阅读全文]
结合筛选,或后随着扩增的结合筛的循环,应继续进行直到得到了合适的变异体,或者直到已经能推断出得不到这样的克...[阅读全文]
辛酸提取法该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液...
激光扫描共聚焦显微镜不仅可以对生物样本进行二维和三维图像分析,还可以与荧光探针相...
蛋白质在细菌中表现后,以反复的冻-解冻方法打破细胞,再用酸铵把蛋白质沉淀下,此步...