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噬菌体克隆鉴定方法

时间:2011-12-16 23:30|来源:实验室前沿| 分享|点击:


 结合筛选,或后随着扩增的结合筛的循环,应继续进行直到得到了合适的变异体,或者直到已经能推断出得不到这样的克隆。这个过程理论上的描述已经被提出来了。

内容来自实验室前沿网站

一旦结合筛选进行到了出现富集这一步,在进一步的全面分析之前,可以分别定性地鉴定单克隆的结合特性。
 
 [器材和试剂]
大肠杆菌XLl—Blue菌株(Stratagene)
VCSMl3噬菌体(Stratagene)
LB/carb琼脂平板
2YT/carb培养基
96微量滴定管阵列
无菌牙签
结合缓冲液
Nunc Maxisorp型微孔板(VWR)
可以离心96孔板的离心机:如Sigma—3K12(B.Braun Biotech International)
 
[方法]
1。用已中和的洗脱液中的噬菌体感染处于对数期(OD600=0.3~0.6)的XLl—B1ue菌液,  37℃孵育l小时,铺在LB/carb琼脂平板上,37℃培养过夜。
2.在96微量滴定管阵列的每一孔中,加入400/ul含VCSMl3(109cfu/m1)的2YT/carb培养基。
3。挑取不同的单克隆加入每一个孔(将移液枪枪头或牙签轻轻浸入培养基)。
4.小心将微量滴定管阵列放入回转式振荡器,37℃培养过夜。
5.2500r/min离心滴定管架10分钟。
6。将50ul上清液分别加入靶标包被的微孔板和无包被的微孔板,再加入50ul结合缓冲液。
7。洗涤微孔板,进行标准ELISA。
8,那些被证实与靶标有特异性结合的克隆中的噬菌体,可以从96微量滴定管阵列中获取,以用于DNA测序。
Tags:方法,鉴定,克隆,噬菌体,
责任编辑:何辉

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