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测序模板的快速纯化规程

时间:2012-04-10 23:36|来源:实验室前沿| 分享|点击:


 
【材料和试剂】
(1)真空泵
(2)PEG/NaCl溶液
(3)碘化物缓冲液
(4)70%乙醇
(5)TE缓冲液
     10mM Tris-HCl,pH 8.0;
     1mM EDTA
 
【操作步骤】
(1)扩增噬斑(见上述),在第一次离心后,将500ml含有噬菌体的上清转入新的离心管中。
(2)加入200ml PEG/NaCl,颠倒混匀,室温静置10min。
(3)离心10min,倾去上清。
(4)再次短暂离心,仔细吸去残留上清。
(5)用100ml碘化物缓冲液完全重悬沉淀物,加入250ml乙醇。室温孵育10min,室温短暂孵育将选择性沉淀单链噬菌体DNA,而大部分噬菌体蛋白保留在溶液中。
(6)离心10min,倾去上清,用70%乙醇洗涤沉淀物,真空吸干。
(7)用30ml TE缓冲液重悬沉淀物。
(8)取5ml作为测序模板,或根据需要增减。
Tags:规程,纯化,快速,模板,测序,
责任编辑:何辉

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