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ELISA法检测血吸虫抗体技术

时间:2011-12-19 01:14|来源:实验室前沿| 分享|点击:


[检测方法]  ELISA法

    [方法学原理]  将血吸虫可溶性抗原与固相载体联结形成固相抗原,加待检血清,如血清中有特异性抗体则与固相抗原相结合,形成固相抗原抗体复合物;再加HRP标羊抗人IgG抗体,形成固相抗原—抗体—羊抗人IgG酶标记抗体复合物,在此基础上加酶底物显色,颜色深度与抗体含量成正比。
    [标本准备]  不抗凝静脉血2ml
    [试剂]
    1.日本分体血吸虫可溶性抗原
    2.HRP标记羊抗人IgG
    3.0.05mmol/LpH9.6碳酸盐缓冲液
    4.稀释液和洗涤液
    5.酶底物液
    6.2mol/LH2504溶液
    7.正常人(阴性对照)血清
    [检测步骤]
    1.日本血吸虫可溶性虫卵抗原用pH9.6碳酸盐缓冲液作1:3 000稀释,包被反应板,每孑岫口lOOtA,置4℃环境中过夜。
    2.用前洗涤包被板3min× 3,加被检血清,每份标本做3孔,每孔lOOgl,另加正常人(阴性对照)血清2孔。37C环境中保温2h,洗涤3minX3。
    3.加HRP-抗人IgG,每孔100gl,37℃环境中放置2h,洗涤3rainX3。
    4.加酶底物液每孔100~1,于室温环境中避光保存30min,各孔加2mol/L H2S04 1滴终止反应,用酶标比色仪490nm测各孔A值。
    [参考范围]  血吸虫抗体阴性
    [注意事项]
    1.待检血清应新鲜或冰冻保存,不能污染。
    2.在实验室的全部洗涤过程中,清洗要彻底,以除去末参与反应的所有物质。
    3.试剂盒应保存于4一-20C冰箱中,用前取出,待试剂恢复至室温后使用。
    [临床意义]  粪便中虫卵阳性者血清中抗体检出率为97%以上,正常人有2%~3%假阳性。不同种属寄生虫无明显交叉反应。1979年,Tamaka应用ELISA间接法测日本分体血吸虫患者抗体阳性率为100%。本法具有高度的敏感性,但有1%一2.3%假阳性,对同种属曼氏和埃及血吸虫有交叉反应。
Tags:抗体,技术,血吸虫,检测,法,ELISA,
责任编辑:何辉

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