聚丙烯酰胺凝胶薄片35S、14C或3H的放射活性测定
1.用自显影X线胶片作模板,切下含放射性目的蛋白的凝胶片段,已经干燥但尚未固定的凝胶很容易操作。
2.将凝胶薄片放入放射性计数小瓶中。
3.用最小量的水(20u1/1X 5mm薄片)膨胀凝胶薄片(室温30min)。
4.或将凝胶薄片溶解于1.0mi由19份30%的过氧化氢和1份14.8mol/L氢氧化铵组成的溶液中,37℃温育过夜,然后加入水溶性闪烁液。
或加入10ml新鲜配制的氨/助溶剂/闪烁液(将0.5ml 14.8mol/LNH40H加10mlNCS助溶剂或Solusol内,混合,加至100ml以甲苯作溶剂的闪烁液内)。室温下振摇温育过夜(Ward,1970)。
聚丙烯酰胺凝胶薄片32P或125I放射活性测定
1.用自显影x线胶片作模板,切下含放射性目的蛋白的凝胶片段。
2.将凝胶薄片放入放射性计数小瓶中,32p样品可用Cerenkov法记数,125I样品用γ计数器记数。
注:Cerenkov记数法的效率取决于样品的体积,应对相同大小的凝胶片段作比较。