平板法单向扩散试验此法由Mancini于1965年提出，是目前最常用的简易抗原定量技术，其要点是：将抗体或抗血清混入o．9％琼脂糖内(约50℃)，未凝固前倾注成平板，凝固后在琼脂板上打孔(一般直径为3～5mm)，孔中加入抗原溶液，放室温或37℃让其向四周扩散，24—48h后可见周围出现沉淀环。
单向辐射状免疫扩散
上排为5个不同的参考；中、下排为患者血清；下排右2为一异常病理血清
由于试验中抗原向四周扩散，故又称单向辐射状免疫扩散(single radialimmunodeffusion，SRID)。最后，量沉淀环的直径或计算环的面积。沉淀环直径或面积的大小与抗原量相关，但不是直线相关，而是对数关系。同时，这种沉淀环还与分子量和扩散时间有关。抗原含量与环径的关系有两种计算方法。
各种蛋白质只要符合以下3条，几乎皆可用SRID定量测定：①备有仅对某待测抗原的单价特异抗血清；②备有已知含量的标准品；③待测品含量在1．25gg／ml以上(单向扩散技术的敏感度)。现在最常用于临床检测的项目有IgG、IgA、IgM、C，、C：、转铁蛋白、抗胰蛋白酶、糖蛋白和前清蛋白等多种血浆蛋白。
在检测标本的同时，用已知含量的标准抗原作5—7个稀释度，同时测量圈的大小。按扩散时间(Fahey和Mancini法)的不同，取方格纸或对数纸做标准曲线图。
单向琼脂免疫扩散法作为抗原的定量方法，其重复性和线性皆是可信赖的，惟敏感度稍差(不能测ug／ml以下含量)。另外，以下影响因素也应注意：①抗血清不但要求亲和力强、特异性好、效价高，而且还应注意存放的方法，防止效价下降。②标准曲线测定必须同时制作，决不可一次做成，长期应用。③测定时必须同时加测质控血清，以保证测量准确性。④有时出现扩散圈呈两重沉淀环的双环现象。这是由于出现了不同扩散率，但抗原性相同的两个组分。例如。重链病血清中出现的。重链和正常IgA两种成分并存，它们皆与抗IgA发生反应，就形成内外两重环(图5—lO)。⑤在单向扩散试验时，有时会出现结果与真实含量不符，这主要出现在Ig测定中。如用单克隆抗体或用骨髓瘤纯抗原免疫动物获得的抗血清，都存在结合价单一的现象，若用此作为单向扩散试剂测量正常人的多态性抗原，则抗体相对过剩，使沉淀圈直径变小，测量值降低。⑥测得结果的假阳性升高现象与上面相反，如用多克隆抗体测定单克隆病(M蛋白)，则抗原相对过剩(单一抗原决定簇成分)，致使沉淀圈呈不相关的扩大，从而造成某一成分的伪性增加。
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