该方法又称变态反应试验，主要检测机体变态反应水平的高低。因为变态反应一般在感染后20～25天出现，因此不宜做早期诊断。本方法主要用于动物的大群检疫。
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用游标卡尺测量注射部位皮肤厚度，然后0．1ml布氏杆菌素，在尾褶、肋腹部或颈侧部进行皮内注射，48～72h后用游标卡尺重新测量，局部肿胀变硬为阳性反应，但可疑反应要小心解释。皮肤增加厚度为1．5～2mm或以上时应判为阳性。
本试验具有极高的特异性，这样布氏杆菌素阳性而血清学阴性的动物可视作感染动物。另外，本试验结果有助于解释在无布氏杆菌病的地区感染有交叉反应的细菌而造成的血清学反应。但布氏杆菌素试验不能检出所有感染动物个体，因此，在国际贸易中不能单独作为正式的诊断试验，而应有可靠的血清学试验(如ELISA)进一步证实。
皮内注射布氏杆菌素可诱导细胞反应的暂时性无应答，因此同一动物两次检查之间应间隔6周以上。
