一、原理
本法是由Geoghegan等(1978)首次应用金标探针检测B淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒(大于20nm)标记在第二抗体或SPA分子上，制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标SPA与特异性抗体结合，形成抗原—抗体—金标抗体复合物，此时在光镜(10X100倍)下可见红色颗粒物，即为抗原—抗体结合物。该方法称为免疫金染色(immunogold staining，IGS)。其特点简便、快速(因不需银显影)，要求金标抗体浓度高，而且金颗粒直径大于20nm。
二、IGS间接法染色步骤
(1)4/lm石蜡切片常规脱蜡至水，0．05mol/L(pH7．4)TBS洗2×3min。
(2)1％卵蛋白[EA，用0．05mol/L(pH7．4)TBS稀释]温育15min，不洗。
(3)加入适当稀释特异性抗体，37℃温育1h，0．05mol/L(pH7．4)TBS洗2X3min。
(4)0．02mol/L(pH7．4)TBS(内含0．1％BSA)洗10min。
(5)1％卵蛋白温育15min，不洗。
(6)适当稀释的金标记SPA30nm(PAG30nm)室温孵育1～2h，0．05mol/l(pH7．4)TBS洗3X3min。
(7)双重蒸馏水洗5min，1％戊二醛洗10min，双重蒸馏水洗5min。
(8)用0．01％伊文斯蓝衬染3min，50％缓冲甘油封片。
(9)结果观察：阳性呈现红色细颗粒状。
