流式细胞仪最大的贡献在于促进了免疫学基础研究和临床诊断。目前流式细胞术已被广泛用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、病理学、遗传学和临床检验等多学科领域的基础和临床研究。
1.流式细胞仪的功能
(1)细胞参量分析
包括细胞大小、形状、蛋白荧光、氧化还原状态,膜的结构、流动性、微粘度、膜电位,酶活性,钙离子含量,pH值,染色质结构,DNA合成,碱基比例等。
(2)细胞表型分析
从1982年正式以CD(clustor of differentiation) 来表达(示)白细胞分化抗原。己确定的CD序号从CDl一CD247,这些细胞表面分化抗原,可以将人体组织细胞分为T细胞、B细胞、髓样细胞、血小板、NK细胞、粘附分子、内皮细胞,细胞因子受体/趋化性细胞因子受体、干细胞/祖细胞、碳水化合物/凝集素、非谱系组共13系。CD抗原在细胞表面的获得和丢失在一定程度上反映细胞分化程度和功能状态。研究CD的意义在于①理解CD抗原分子本身的一些特性及其与免疫功能的关系;②认识和探讨CD抗原所表达细胞的功能及其在疾病发生中的作用。
本文来自实验室前沿
(3)细胞分选
这是FCM的一项重要功能,目前FCM对细胞亚群的分选纯度可以达到99%,除了对特定的亚群加以分选外,还可以分出所需要的染色体加以分析甚至能结合PCR方法加以扩增,这多用于研究中。
2.流式细胞仪检测在临床的应用
流式细胞仪的功能决定了其在医学领域的重要地位,目前在临床上主要用于细胞表型分析、造血系肿瘤诊断和分型、移植前配型及与免疫有关疾病分析等。
(1)CD抗原与白细胞分析
①T细胞
CD3+(注意下面CD分子的格式应一致):成熟T淋巴细胞,是鉴定T细胞的重要标志,判断细胞免疫状况。
CD4+: T辅助/诱导细胞亚群
CD8+: T抑制/细胞毒亚群
CD4+ /CD8+比值:是免疫状态标志的检测指标,正常CD4+ /CD8+比值为1.2∽2.9,在肿瘤、免疫缺陷病、病毒感染、自身免疫病、器官移植后都有诊断、预后和治疗的指导价值,其比例降低与病变程度有关。 内容来自实验室前沿网站
CD8+ /CD28+ 与CD8+ /CD28—:前者为细胞毒T细胞(Tc),后者为抑制性T细胞(Ts)。
CD4+/CD25+ 与CD4+ /CD25—:前者为免疫调节性T细胞,后者为效应T细胞。
CD4+ /CD29+:辅助性诱导细胞,辅助B细胞产生抗体和诱导细胞介导的淋巴细胞溶解作用,自身免疫性疾病可见增多。
CD4+ /CD 45RA+ 与CD4+ /CD 45Ro+:前者为原初细胞(naive cell)主要功能是诱导Ts细胞活化和辅助其功能活性。SLE、MS患者外周血CD4+ /CD 45RA+细胞减少,后者为记忆细胞(memory cell)。
②B淋巴细胞:CD19+是总的B淋巴细胞特异抗原,判断体液免疫状况。CD23+为IgE低亲和力受体,分布于B淋巴细胞、嗜酸粒细胞上,增多与变态反应性疾病、肾病综合症、白血病等有关。 实验室前沿,了解实验室动态
③NK淋巴细胞: CD3—/CD(16+56)+ 细胞表型。
④单核/巨噬细胞标志:CD14+细胞
(2)CD 抗原与血小板分析
分析单个血小板或血小板亚群膜糖蛋白,是血小板膜糖蛋白检测分析方法学上的重大发展,对先天性与获得性血小板膜糖蛋白异常所致疾病的诊断,尤其是评价血栓性疾病与血栓前状态发生与发展过程中血小板的活化程度及其诊断、治疗、预防等具有特别重要的意义。FCM分析血小板膜糖蛋白方法简便、快速、标本用量少、灵敏度高、特异性强、结果准确,为血小板的基础和临床研究提供了崭新的手段。
CD62p(P选择素)是一种糖蛋白,存在于血小板α颗粒以及内皮细胞中。CD62p在体内或体外刺激后,即转移至膜表面,巨核细胞也有表达。CD62p又称GMP—140或PADGEM蛋白(血小板活化依赖α颗粒膜蛋白),它在血小板与单核细胞及中性粒细胞相互作用中起关键作用。
CD63为溶酶体膜糖蛋白,在多种细胞的表面和胞浆内,尤其是在血小板内部都能检测到,血小板活化后即转移至膜表面。 实验室前沿,了解实验室动态
测血小板相关免疫球蛋白(PAIg)包括抗IgG、IgM、IgA有助于诊断免疫性血小板减少症。
一些血小板的胞浆中含有核酸物质RNA,可被噻唑橙(Thiazole orange,TO)染色称网织血小板。网织血小板是刚从骨髓中释放出来的血小板,可用于血小板减少性疾病的鉴别诊断和疗效监测。
这是FCM的一项重要功能,目前FCM对细胞亚群的分选纯度可以达到99%,除了对特定的亚群加以分选外,还可以分出所需要的染色体加以分析甚至能结合PCR方法加以扩增,这多用于研究中。
2.流式细胞仪检测在临床的应用
流式细胞仪的功能决定了其在医学领域的重要地位,目前在临床上主要用于细胞表型分析、造血系肿瘤诊断和分型、移植前配型及与免疫有关疾病分析等。
(1)CD抗原与白细胞分析
①T细胞
CD3+(注意下面CD分子的格式应一致):成熟T淋巴细胞,是鉴定T细胞的重要标志,判断细胞免疫状况。
CD4+: T辅助/诱导细胞亚群
CD8+: T抑制/细胞毒亚群
CD4+ /CD8+比值:是免疫状态标志的检测指标,正常CD4+ /CD8+比值为1.2∽2.9,在肿瘤、免疫缺陷病、病毒感染、自身免疫病、器官移植后都有诊断、预后和治疗的指导价值,其比例降低与病变程度有关。 内容来自实验室前沿网站
CD8+ /CD28+ 与CD8+ /CD28—:前者为细胞毒T细胞(Tc),后者为抑制性T细胞(Ts)。
CD4+/CD25+ 与CD4+ /CD25—:前者为免疫调节性T细胞,后者为效应T细胞。
CD4+ /CD29+:辅助性诱导细胞,辅助B细胞产生抗体和诱导细胞介导的淋巴细胞溶解作用,自身免疫性疾病可见增多。
CD4+ /CD 45RA+ 与CD4+ /CD 45Ro+:前者为原初细胞(naive cell)主要功能是诱导Ts细胞活化和辅助其功能活性。SLE、MS患者外周血CD4+ /CD 45RA+细胞减少,后者为记忆细胞(memory cell)。
②B淋巴细胞:CD19+是总的B淋巴细胞特异抗原,判断体液免疫状况。CD23+为IgE低亲和力受体,分布于B淋巴细胞、嗜酸粒细胞上,增多与变态反应性疾病、肾病综合症、白血病等有关。 实验室前沿,了解实验室动态
③NK淋巴细胞: CD3—/CD(16+56)+ 细胞表型。
④单核/巨噬细胞标志:CD14+细胞
(2)CD 抗原与血小板分析
分析单个血小板或血小板亚群膜糖蛋白,是血小板膜糖蛋白检测分析方法学上的重大发展,对先天性与获得性血小板膜糖蛋白异常所致疾病的诊断,尤其是评价血栓性疾病与血栓前状态发生与发展过程中血小板的活化程度及其诊断、治疗、预防等具有特别重要的意义。FCM分析血小板膜糖蛋白方法简便、快速、标本用量少、灵敏度高、特异性强、结果准确,为血小板的基础和临床研究提供了崭新的手段。
CD62p(P选择素)是一种糖蛋白,存在于血小板α颗粒以及内皮细胞中。CD62p在体内或体外刺激后,即转移至膜表面,巨核细胞也有表达。CD62p又称GMP—140或PADGEM蛋白(血小板活化依赖α颗粒膜蛋白),它在血小板与单核细胞及中性粒细胞相互作用中起关键作用。
CD63为溶酶体膜糖蛋白,在多种细胞的表面和胞浆内,尤其是在血小板内部都能检测到,血小板活化后即转移至膜表面。 实验室前沿,了解实验室动态
测血小板相关免疫球蛋白(PAIg)包括抗IgG、IgM、IgA有助于诊断免疫性血小板减少症。
一些血小板的胞浆中含有核酸物质RNA,可被噻唑橙(Thiazole orange,TO)染色称网织血小板。网织血小板是刚从骨髓中释放出来的血小板,可用于血小板减少性疾病的鉴别诊断和疗效监测。