免疫荧光细胞化学染色直接方法
1．染色 切片经固定后，滴加适当稀释度的荧光抗体(如兔抗人广球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等)，在室温或37’C环境下染色30min，将切片置人能保持潮湿的染色盒内，以防止干燥。
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2．洗片 倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7．4或pH7．2的PBS中洗2次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水漂洗lmin，除去盐结晶。
3． 用50％缓冲(pH9．0—9．5的0．5mol／L碳酸盐缓冲液)甘油封固、镜检。
4．对照染色
(1)正常免疫荧光血清染色，如上法处理切片，结果应为阴性。
(2)染色抑制试验(一步法)：将荧光抗体和未标记的抗体球蛋白或血清等量混合，如上法处理切片，结果应为阴性。为证明此种染色抑制不是由于荧光抗体被稀释所致，可用盐水代替未标记抗血清，染色结果应为阳性。此法结果较二步法稳定。
(3)阴性对照抗原染色试验前面已作叙述。
直接法比较简单，适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌，以及浓度较高的蛋白质抗原，如肾、皮肤的检查和研究。此法的每种荧光抗体只能检查一种相应的抗原，虽然特异性高，但敏感性较低。
